经典的超速离心法（差速离心）、密度梯度离心法在外泌体制备过程中经常受到大型仪器的资源限制，并且操作复杂、耗时、外泌体得率也低。4008云顶国际生物自主研发的Exosome Isolation Q3（简称EIQ3）系列沉淀法外泌体提取剂盒，不仅有效提高外泌体得率，同时经过技术改良，能够显著减少杂蛋白残留（如血清高丰度蛋白）。该试剂盒可以实现血清、血浆、尿液、细胞上清等液质样本中外泌体的快速提取，为后期外泌体研究的数据稳定性和可靠性提供保障。

 

 

 

|   EIQ3外泌体提取试剂盒-产品规格

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|   EIQ3外泌体提取试剂盒-优势

●  外泌体纯度高（Quality）  

●  外泌体得率高（Quantity）

●  操作简便，周期短（Quick）

|   EIQ3外泌体提取试剂盒-操作流程

|   EIQ3外泌体提取试剂盒 - 实用效果

       应用4008云顶国际生物EIQ3系列外泌体提取试剂盒提取的外泌体，可用于不同的外泌体鉴定实验，包括电镜观察，NTA分析，Western Blot鉴定外泌体marker等。以下实测结果以血清/尿液外泌体提取数据为例进行展示和分析：

EIQ3与超速离心等技术对比

案例   EIQ3提取的外泌体进行全转录测序的结果与UC更为接近

       上海交通大学医学院附属瑞金医院的科研人员开展了一项研究（PMID: 32716349），系统地比较了多种商业化试剂盒与UC法提取血浆外泌体的差异，以为科研人员选择商业化试剂盒提取外泌体提供的参考[6]。研究人员入组了9例癌症患者（其中正常对照、早期患者、转移患者各3例），将同组患者的血浆合并，总共得到3份血浆样本，每组的血浆样本分为6等分，分别采用5种商业试剂盒包括Wayen Exosome Isolation kit（WY，4008云顶国际生物EIQ3）、ExoQuick（SBI）、miRCURY Exosome Kits（Qiagen）、Ribo Exosome Isolation Reagent（Ribo）、Total Exosome Isolation （Fisher）和UC（ultracentrifugation）分离外泌体。最后，对分离得到的外泌体进行转录组测序，比较各种分离方法在测序结果上的差异（图1）。

                            图1.各种外泌体提取试剂盒和超速离心方法的操作流程

       首先，各种试剂盒在提取的外泌体粒径上并无明显差异，检测的外泌体粒径均在100 nm左右（图2A）。但相对其他试剂盒，Wayen Exosome Isolation kit在外泌体提取浓度上相对较高，1mL血浆样本含有更多的外泌体颗粒，而UC提取的外泌体浓度在所有方法中相对较低（图2B）。

                    图2. 各种方法分离的外泌体粒径和浓度的比较

          图3.各种方法分离的外泌体evRNA文库长度分布的比较

       接着，研究人员对比分析了各种试剂盒提取的血浆外泌体中各种类型RNA的比例，发现Wayen Exosome Isolation kit的表现和UC更为接近，所测得的short-noncoding RNA, pseudogene, long-noncoding RNA 及protein-coding genes比例基本相同，而其他试剂盒检测结果与UC存在较大差异（图4）。

          图4. 不同方法分离的外泌体中各类RNA的比例

       最后，关于各种方法提取的外泌体进行RNA的聚类分析，无论是Control组、primary组，还是metastatic组，同样是Wayen Exosome Isolation kit提取的外泌体RNA与UC组更为接近（图5）。

          图5. 不同方法分离的外泌体中RNA聚类分析

       总体来说，EIQ3提取的血浆外泌体在用于转录组分析上，其表现与UC更为接近。

[1].  Zhang Zhengchuan, Xu Ruogu, Yang Yang, et al. Micro/nano-textured hierarchical titanium topography promotes exosome biogenesis and secretion to improve osseointegration. J Nanobiotechnology, 2021, 19: 78.

[2]. Li Qijie, Fang Lu, Chen Junjie, et al. Exosomal MicroRNA-21 Promotes Keloid Fibroblast Proliferation and Collagen Production by Inhibiting Smad7. J Burn Care Res, 2021, 42: 1266-1274.

[3]. Liu Huawei, Zhao Fan, Zhang Kai, et al. Lactobacillus plantarumInvestigating the growth performance, meat quality, immune function and proteomic profiles of plasmal exosomes in -treated broilers with immunological stress. Food Funct, 2021, 12: 11790-11807.

[4]. Li Yun, Ji Jin, Lyu Ji, et al. A Novel Urine Exosomal lncRNA Assay to Improve the Detection of Prostate Cancer at Initial Biopsy: A Retrospective Multicenter Diagnostic Feasibility Study. Cancers (Basel), 2021, 13: undefined.

[5].  Song Zhiqi, Xu Yanfeng, Zhang Ling, et al. Comprehensive Proteomic Profiling of Urinary Exosomes and Identification of Potential Non-invasive Early Biomarkers of Alzheimer's Disease in 5XFAD Mouse Model. Front Genet, 2020, 11: 565479.

[6].  Peng C, J Wang, Bao Q, et al., Isolation of extracellular vesicle with different precipitation-based methods exerts a tremendous impact on the biomarker analysis for clinical plasma samples.  Cancer biomarkers : section A of Disease markers. 2020;29(3):373-385.

[7].Yang, Q. et al. Novel Biomarkers of Dynamic Blood PD-L1 Expression for Immune Checkpoint Inhibitors in Advanced Non-Small-Cell Lung Cancer Patients. Front. Immunol. 12, 665133 (2021). IF=8.0